1、动物组织:主要原料为鸡冠和牛眼玻璃体等。用丙酮或乙醇将原料脱脂、脱水，用蒸馏水浸泡、过滤，随后用氯化钠水溶液和氯仿溶液处理，随后加胰蛋白酶保温后得到混合液，最后用离子交换剂处理、纯化得到精制的玻尿酸。该方法提取率极低，仅1%左右，分离过程复杂，玻尿酸价格高，达5000美元/公斤，限制化妆品大量使用。
2、微生物发酵：以葡萄糖作为碳源发酵液。在培养基中发酵48小时，发酵结束后，过滤去除菌丝和杂质，通过酒精沉淀法等简单操作获得高纯度的产物。采用发酵法制造的透明质酸，优点是能按商品设计来设定分子量大小。发酵法的关键是菌种的选择，多选择链球菌、乳酸球菌等。
3、化学合成:采用天然酶聚合反应，首先使用多糖聚合物合成透明质酸氧氮杂环戊烯衍生物，添加水分解酶，制作衍生物和酶复合体，最后在90度摄氏反应液中去除酶，合成透明质酸。采用人工合成法可以大大降低玻尿酸的制造成本，但结构不纯。
